一、 课题来源与背景 课题来源：科技计划内容-地方计划 课题来源单位：广州市科学技术局 二、 技术原理及性能指标 1. 技术原理 本项目阐明了应激负荷诱发病毒易感性发生的生物学机制，建立和拓展了有特色且适宜的药效评价方法，并利用此评价方法完成了多种中药及中药活性成分的药效作用评价及机理研究。 2. 性能指标 （1）建立情志应激负荷 H1N1 流感病毒易感模型 研究采用拘束应激模型成功建立了情志应激诱导的 H1N1 流感病毒易感的体内模型，并采用拘束应激产生的主要效应产物应激激素皮质酮负荷 A549 细胞成功建立了流感病毒易感体外模型。实验结果发现：拘束应激能够显著增加 H1N1 流感病毒感染小鼠的死亡率，能够显著增加 H1N1 流感病毒感染小鼠肺组织中的病毒蛋白 NP 的表达水平。此外对小鼠的肺部进行切片染色，发现相比单纯病毒感染组，拘束应激负荷病毒感染小鼠肺部炎症加剧，炎症细胞浸润更加明显，出现了大量的中性粒细胞及巨噬细胞。同样，在体外易感模型中，我们发现应激激素皮质酮能够促进 H1N1 流感病毒感染的A549细胞发生病变，能够显著增加 A549细胞流感病毒蛋白 NP 的表达水平。以上实验结果能说明拘束应激及应激激素皮质酮能够增加 H1N1流感病毒易感性。该研究结果为后期探索情志应激增加流感病毒易感性的分子机制提供了很好的保障。 （2）研究情志应激对先天免疫线粒体抗病毒信号通路的影响 利用前面建立的体内和体外易感模型，进一步研究了拘束应激对线粒体抗病毒信号通路 MAVS 的影响。研究发现拘束应激及其效应物质皮质酮（CORT）能够显著降低 IFN-β、IFITM3 和 MAVS 的表达水平，降低 IRF-3 的磷酸化水平，损伤线粒体，影响 MAVS 与线粒体的共定位。以上结果表明，拘束应激以及其主要效应产物应激激素皮质酮能够通过抑制线粒体抗病毒信号通路的激活，增加 H1N1 流感病毒易感性。 （3）研究情志应激增加 H1N1 流感病毒易感性的生物学机制 进一步探讨了拘束应激以及应激激素皮质酮（CORT）增加流感病毒易感性的作用机理：CORT 增加了 Mfn2 的表达，Mfn2 募集 E3 连接酶 SYVN1 引发 MAVS 的泛素化降解，进而抑制了 MAVS/pIRF3/IFN-β 抗病毒信号，促进病毒的复制，使机体对流感的易感性增加。 （4）利用建立的流感病毒易感模型对中药复方及中药活性成分进行药效评价和机理研究 在建立的体内和体外流感易感模型上研究了多种中药复方及其活性成分干预流感病毒易感性的作用及机制研究。研究发现，清热消炎宁、石歧外感凉茶、抗病毒口服液等中药复方及中药活性成分靛玉红、表告依春等能够通过促进 IFN-β 的表达，增强 MAVS 抗病毒信号通路，降低拘束应激小鼠对流感的易感性。 三、 技术的创造性与先进性 本项目在研究方向选择、研究思路设计、研究方法采用及研究工作基础等的等方面形成了一定的学术特色和创新，其内容主要包括以下几个方面： 1) 本项目中从拘束应激产生的主要效应分子应激激素皮质酮调控天然免疫增加流感病毒易感性的角度，进一步探讨了应激负荷诱发病毒易感性发生的生物学机制，并在此基础上阐明了多种中药及中药活性成分的作用机理。项目在科学问题、构思和技术方法选择上具有创新性。 2) 该项目聚焦中医情志致病理论，从“疾病易感性”的视角，以应激负荷为基础创新和建立适合中医药作用特点的疾病易感动物模型，深入研究应激负荷诱发疾病易感的机制。利用我们建立的病毒易感性实验模型能够有效的评价和探讨中药降低病毒易感性，防治流感的药效及可能机制，也有望成为中药抗病毒药效评价方法的共性技术，为中药抗病毒的临床应用提供理论依据，同时也能够应用于抗病毒药物的筛选和研发，具有很好的应用价值和前景。 四、 技术的成熟程度，适用范围和安全性 该项目利用情志应激建立的病毒易感模型表征清热解毒中药的药效，围绕“大企业、大品种”，重点解决药效评价等制约中药产品发展的瓶颈问题。采用“流感病毒易感”模型，能有效地评价多个清热解毒类中药大品种的药效，并在作用效果明确的基础上阐明其作用机制、作用靶标和活性成分。 五、 应用情况及存在的问题 该项目已获得的成果利用现代医学技术手段和方法阐明了情志因素与流感病毒易感性的关联性，揭示了情志应激引起流感病毒感染“易感性”的新病理机制，丰富了中医情志致病理论的科学内涵，同时也对研究和开发临床防治流感病毒感染的药物提供新靶标和思路。此外，该项目建立了适用于抗病毒中药活性评价的共性技术，为评价其他中药防治病毒感染提供很好的借鉴作用，能够帮助推进中药的临床开发及应用。 六、 历年获奖情况 相关研究获得了广东省科技进步一等奖（名称：基于疾病易感性的中药药效评价及应用，2018年）和教育部科技进步二等奖（名称：情志致病理论指导下的中药药效评价体系的建立及应用，2018年）。同时，项目成员负责人李怡芳获得了企业产学研合作研究项目（2019年），暨南大学双百英才暨南杰青第一层次人才计划（2020年）、暨南大学王宽诚青年学者计划（2020年）、教育部青年长江学者人才项目（2020年）和广州市科技计划项目-市校（院）联合资助项目（2021年，202102010116）等资助。