上皮间质转化（EMT）是肝癌转移的重要始动环节。我们前期已报道miR-145在乙肝（HBV）相关肝癌中下调促进肝癌侵袭，但miR-145自身低表达的机制不明？我们发现： HBx可抑制miR-145表达，其机制可能是通过转录因子YY1作用；而miR-145可能再通过其预测靶基因HBXIP进而抑制HBx。本项目拟通过体内外试验阐明HBx-YY1-miR-145-HBXIP环路在促进肝癌进展中的作用及机制，为确立miR-145为肝癌防治新靶点提供可靠的科学依据。该项目在广东省科技计划的支持下进行。

② 研究目的与意义

本项目旨在获得HBx-YY1-miR-145-HBXIP环路在促进肝癌进展中的可靠证据，为确立miR-145为肝癌防治新靶点具有重要的意义。

③ 主要论点与论据

前期我们为了确定HBV相关肝癌中YY1与miR-145的相关性，前期我们通过预实验应用RNA干扰技术沉默YY1，结果发现沉默YY1可明显上调miR-145表达，这些结果提示YY1可抑制肝癌中miR-145表达。有研究发现组蛋白去乙酰化酶（Histone deacetylase, HDAC）与肝癌发生发展有关；同时有研究亦发现乙型肝炎病毒X蛋白（Hepatitis B virus X protein, HBx）可募集组蛋白去乙酰化酶1（Histone deacetylase 1,HDAC1）而使相应作用因子去乙酰化。为了明确HBx、YY1与miR-145三者间的相互作用关系，我们进一步通过预实验发现，在肝癌细胞中分别通过过表达HBx和siRNA沉默YY1来干预，结果发现随着HBx表达增高miR-145表达量显著下调，单独通过沉默YY1可逆转这一趋势，共转染HBx过表达质粒及沉默YY1时miR-145并未明显改变。因此，我们推测miR-145表达减少是通过HBx作用于转录因子YY1而产生的。

我们进一步通过预实验发现，通过使用anti-miR-145去表达miR-145及siRNA沉默HBXIP的干预措施影响肝癌细胞，结果发现HBx mRNA及蛋白表达随着miR-145减少而上调，通过siRNA沉默HBXIP后可以逆转这个趋势，HBx mRNA及蛋白表达水平无明显改变。这些结果显示HBXIP与HBV-肝癌的发生发展有一定相关性，提示miR-145抑制HBx可能通过靶向抑制HBXIP来实现。

综合目前的研究进展及我们的前期研究，我们提出以下假说：miR-145通过其预测靶基因HBXIP抑制HBx进而抑制肝癌的增殖侵袭转移；HBx则通过YY1转录因子抑制miR-145促进肝癌的增殖侵袭转移。

④ 创见与创新

本项目是在我们前期miRNA 作为肝癌标志物研究工作基础上的深入机制研究，具有原创性。主要着眼于临床瓶颈（HBV 相关肝癌发病机制不清），从而寻找新的诊断及治疗靶点。本项目首先提出YY1 通过调控miR-145 而使其减少对HBXIP 与HBx 抑制，同时HBx对YY1的调控下调miR-145 而促进肝癌发生发展的科学假说；首次阐述YY1-miR-145-HBXIP-HBx这一环路对肝癌发生发展的调控作用及其机理；充分利用本课题组丰富的病例资源，大量临床标本进行验证，为本项目提供可靠的体内数据。这将不仅揭示miR-145在肝癌发生发展的作用及其精确分子机制，而且将为确立miR-145 作为肝癌的早期诊断和靶点治疗提供科学依据和理论基础。

⑤ 社会经济效益，存在的问题

肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma, HCC以下简称肝癌）是威胁我国居民健康最主要的恶性肿瘤之一，我国的肝癌发病及死亡率占全球一半以上。HBV感染是我国肝癌发生的主要致病因素。且肝癌预后极差，中位生存期仅16个月。因此，研究HBV-肝癌的发生发展相关分子机制，对降低肝癌病死率、改善预后和提高存活率具有重要的社会意义，同时也是当前肿瘤机制研究的热点问题。

本研究通过临床标本检测、细胞、动物实验证实了miR-145-5p靶向N-cadherin抑制EMT影响肝癌侵袭转移和索拉非尼耐药是通过调控WNT通路实现。本研究的开展有助于阐明肝癌侵袭、转移的新机制，为确立miR-145-5p作为肝癌诊断标记物和分子治疗新靶点提供更充分的科学依据。

⑥ 历年获奖情况

无

⑦ 成果简介要向社会公开，请不要填写商业秘密内容。

本研究通过临床标本检测、细胞、动物实验证实了miR-145-5p靶向N-cadherin抑制EMT影响肝癌侵袭转移和索拉非尼耐药是通过调控WNT通路实现。本研究的开展有助于阐明肝癌侵袭、转移的新机制，为确立miR-145-5p作为肝癌诊断标记物和分子治疗新靶点提供更充分的科学依据。在本研究的研究过程中共发表5篇SCI文章。