| 癫痫（epilepsy, EP）是一种常见的慢性疾病，是由于脑部神经元高度同步化异常放电所导致的反复的、自发的、短暂的脑功能失调。全世界发病人数约 7000 万人，其高危人群为孩子和老人。癫痫患者主要干预方法是药物治疗，目前有 20 多种抗癫痫药物在临床上使用。然而，临床上应用的抗癫痫药物常伴有一定的副作用，大约 30%-40%的患者对抗癫痫药物无反应。50%的癫痫发作病因不明以及预防癫痫患者的有效措施也不明晰。因此，更详细地了解癫痫发展的机制对制定预防和治疗癫痫是至关重要的。本项目的主要研究内容是研究癫痫的新的发病机制，发现新的治疗靶点及新的治疗药物，同时建立癫痫病动物治疗模型。
项目主要成果如下：
（1）建立了小鼠和米尔猪动物癫痫模型：
我们已成功建立了小鼠的慢性颞叶癫痫模型。通过向单侧海马注射海人酸（KA），小鼠在一段潜伏期后会出现持续的癫痫发作，并且我们还在此基础上进一步开发视觉刺激诱导癫痫的模型，使得癫痫的发生“可控”。我们也成功地建立了迷尔猪癫痫模型。 癫痫猪的大脑应有与癫痫病人相似的病理解剖形态。迷尔猪的繁殖力强，饲养容易，且伦理上较易被接受，该造模过程稳定并且可以重复。
（2） 论证了CCKBR 拮抗剂治疗癫痫的可行性研究：
首先是在癫痫小鼠模型上验证 CCKB 受体拮抗剂的抗癫痫效果。我们用 CCKBR 拮抗剂 YF476 治疗 KA 诱导的慢性癫痫 C57BL/6 小鼠的实验结果表明，单次 YF476 注射和对照组比较，治疗后癫痫发作次数明显减少。我们用已经上市的两个抗癫痫药 Phenytoin 和Carbamazepine 作为对照，验证了 CCK 受体拮抗剂 YF476 对癫痫迷尔猪的抗癫痫的治疗效果。结果显示 YF476 可以缓解严重和轻度癫痫发作。
（3）证实 CCKB 为新型抗癫痫的药物靶点。
颞叶癫痫病人会出现视觉、听觉、嗅觉的变化，我们早期研究也发现手术后给予光照刺激的小鼠会出现光敏感性癫痫，这些都提示颞叶癫痫的病理学变化并不局限于海马或颞叶，新皮层很多地方都出现了病理学改变。CCK 乙型受体主要分布于新皮层，我们认为颞叶癫痫的病人皮层兴奋性提高与 CCK 有关，这是我们使用 CCK 乙型受体拮抗剂治疗癫痫的理论依据。而对颞叶癫痫动物的病理学研究将帮助我们更深入地了解这一机制，该项目已经测试至少 5 个重要神经递质、调质及受体（如 AMPA 受体、NMDA 受体、GABA 受体）在模型动物新皮层中的表达水准，研究结果表明 CCKB 是一个潜在的新的治疗癫痫疾病的靶点。
（4）建立新型 CCK 受体拮抗剂的先导化合物库。
通过对 20000 个化合物的小分子库进行高通量筛选，筛选出 101个活性化合物，其中有 13 个化合物在 10 uM 的浓度下，具有 50%以上的抑制率。筛选出的活性化合物，我们进一步进行了验证。我们设计并合成了 300 个类似新颖的小分子化合物，在一系列新结构化合物中，我们发现了 CCK-523, CCK-536 这类具有较好的抑制率。我们建立了 460 个 CCKBR 拮抗剂的小分子化合物库。
（5）发现新型 CCKR 拮抗剂成药性先导化合物：
我们利用化合物库的高通量筛选得到的活性化合物，进行验证后，得到两类小分子，拟肽类和喹唑啉类。在一系列新结构化合物中，我们发现了 CCK-523, CCK-536 这类具有较好的抑制率， 进一步进行化合物竞争测试验证了 GPCR 细胞钙流检测的结果，其中 10 个新型 CCK乙型受体小分子拮抗剂的 IC50 在 100nM 以下，我们确定 CCK-655 为先导成药性化合物，并进一步用用已经建立的小型猪癫痫模型来检验体内治疗的有效性。实验结果显示 CCK-655 比临床用的 CCKBR 拮抗剂 YF476，对在听觉皮层阻断 TBS 引起 LTP 的效果更加明显。 |
